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威格拉斯生物技术

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DNA片断纯化技术概述

反转录(reverse transcription, RT)是分子生物学中广泛应用的一个技术。RNA依赖的DNA聚合酶(反转录酶)可以用RNA为模板,合成互补的DNA链,称为反转录。获得的cDNA可应用于扩增、克隆、表达等重要工作中。

反转录病毒是自然界存在广泛的病毒类型,含有不同特性的反转录酶。其中以禽源性病毒AMV和鼠源性病毒MMLV的反转录酶在实验研究中使用最广泛。各种原型反转录酶除具有RNA依赖的DNA聚合酶活性外,还具有RNase H活性,该活性能够降解合成的cDNA与RNA杂链中的RNA链,对于cDNA合成有不良影响。AMV反转录酶具有反转录效率高、耐热度高的优点,但其RNase H活性很高,导致cDNA合成片断短的缺点。MMLV反转录酶反转录效率较低、耐热度低,其RNase H活性也较低,适合应用于长片断cDNA的合成。经人工改造的一些MMLV,可以进一步去除其RNase H活性,产生更好的反转录结果。

反转录过程中,随机的外源性RNase,即使是极微量,也可能导致反转录效率的降低甚至失败。在反转录体系中加入RNase抑制剂常常是保证反转录体系正常工作的重要环节。蛋白性的RNase抑制剂是其首选。

本公司生产的MMLV反转录酶,和蛋白性的RNase抑制剂,为实验室反转录工作提供帮助。